Dans le manga Naruto, Orochimaru apparaît dès l'examen chūnin mettant en jeu tous les aspirants ninjas (genins) de tous les villages. Il est l'un des trois ninjas légendaires Sannin du village de Konoha, avec Jiraya et Tsunade.Il est devenu méchant après le meurtre de ses parents commandité par Konoha. Il a déserté le village après la nomination du 4e hokage, et en veut au 3e hokage au point de tenter de le tuer pour ne pas l'avoir nommé à la place. Il a entraîné Anko Mitarashi, la responsable de la seconde épreuve de l'examen ninja. Devenu maître dans l'art des techniques interdites, il constitue l'un des ninjas des plus dangereux et également des plus crains notamment dut à ses expériences pratiqués sur des corps humains .
Durant les 3 années qui suivent, Orochimaru entraîne Sasuke, et avec Kabuto, ils voyagent d'une cachette à l'autre pour éviter d'être facile à retracer. En effet, ils sont non seulement recherchés par des villages tels que Konoha ou Suna, mais également par l'organisation criminelle à laquelle Orochimaru avait précédemment adhéré, Akatsuki.
Il réapparaît lorsqu'il veut affronter son ancien collègue (et l'ancien maître de Kabuto), Sasori. Trompé par Yamato, il affronte Naruto qui se transforme en Kyubi à 4 queues avant de repartir avec Sai.
Après un duel contre Naruto (ayant sorti les quatre queues de Kyubi) avec qui il fait jeu égal, Sai lui fait miroiter l'espoir de reprendre sa guerre contre Konoha en lui apportant des informations primordiales sur les forces spéciales de Konoha et la garde rapprochée de l'Hokage. Il lui propose également une alliance avec Danzo, mais Orochimaru étant lui-même un maître en tromperie devine anguille sous roche. Après la disparition de Kabuto, il découvre Sai avec Naruto et tente de leur faire peur, mais plutôt que de chercher l'affrontement il demande à Naruto d'éliminer d'autres membres de l'Akatsuki avant de disparaître .
Il réalise ensuite qu'ils en voulaient à Sasuke, et après avoir sauvé Kabuto, ils rejoignent le jeune homme pour disparaître avec lui et se rendre à une autre de leurs cachettes.Entre temps Orochimaru continue d'entrainer Sasuke mais plus le temps passe et plus ce dernier s'affaiblit . Dans le chapitre 344 on apprend que le vrai corps d'Orochimaru est un serpent blanc (il a fait des expériences sur son propre corps et chaque écaille est une tête de serpent blanc) d'après le Sandaime Hokage ses parents se seraient réincarnés aussi. Bien que battu par Sasuke, Orochimaru n'est pas complètement mort mais emprisonné dans le corps de Sasuke, piégé dans la propre dimension qu'il avait créé pour réaliser les transferts de son esprit vers de nouveaux corps. Son pouvoir s'est révélé inefficace face au Sharingan de Sasuke, qui garde donc le contrôle de son propre corps. Bien que Sasuke arrivera à le vaincre, il ne faut pas oublier de mentionner qu'Orochimaru était mourant à ce moment et il est possible que si il était en pleine forme, il aurait pu vaincre Sasuke, vu son extraordinaire puissance.